流式细胞分选抗体类型与选择

流式细胞分选抗体是流式细胞术中的核心工具，用于通过荧光标记特异性识别并分选目标细胞。其作用机制、类型选择、应用场景及操作规范如下：

一、作用机制
流式细胞分选抗体通过特异性结合细胞表面或胞内的抗原，将荧光团标记至目标细胞。当细胞通过流式细胞仪的激光束时，荧光团被激发并发出特定波长的光，光电倍增管将光信号转化为电信号，系统通过分析散射光和荧光信号，实现单细胞水平的定量分析与分选。

二、流式细胞分选抗体类型与选择
1.直接标记抗体
①定义：抗体与荧光团直接偶联，形成“抗体-荧光团”复合物。
②优势：操作简便，减少非特异性结合，适合多参数检测。
③选择原则：
荧光强度匹配：弱表达抗原需搭配强荧光染料；强表达抗原可搭配弱荧光染料。
光谱兼容性：避免荧光团发射光谱重叠，常用4色荧光组合为FITC、PE、Percp-cy5.5、APC。
同型对照：选择与标记抗体同种属、同亚型、同荧光标记的抗体，以消除非特异性结合背景。
2.间接标记抗体
①定义：通过二抗连接荧光团，实现信号放大。
②适用场景：待测抗原表达丰度低时，间接标记可增强信号强度。
③注意事项：需增加洗涤步骤以减少二抗非特异性结合。

三、应用场景
1.免疫表型分析：鉴定并定量异质细胞群中的不同亚型。
2.稀有细胞分选：从混合细胞中分离低丰度目标细胞。
3.细胞功能研究：分析细胞增殖、凋亡、活化状态。
4.微生物检测：快速定量水体或发酵液中的微生物。

四、流式细胞分选抗体操作规范
1.样本制备
①单细胞悬液：用血球计数板调整细胞浓度至1×10⁷/mL，过滤去除细胞团块，防止堵塞流式细胞仪。
②封闭处理：加入Fc受体阻断剂减少非特异性结合，尤其适用于含Fc受体的细胞。
2.抗体孵育
①条件：4℃避光孵育30分钟，避免荧光团猝灭。
②洗涤：用PBS或平衡盐溶液洗涤2次，去除未结合抗体。
3.仪器设置
①补偿调节：使用单阳对照或FMO对照设置补偿，确保荧光信号准确分离。
②分选模式：根据目标细胞丰度选择单细胞分选或富集分选，稀有细胞需用单细胞模式提高纯度。
4.质量控制
①抗体滴定：优化抗体浓度以实现z佳信噪比，节约样本。
②同型对照：每批次实验均需设置同型对照，验证抗体特异性。

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