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慢/腺病毒细胞转染详情介绍

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最后更新: 2025-09-02 15:25
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详细说明
慢/腺病毒细胞转染是两种常见的基因转染方法,通常用于基因表达、基因敲除、基因编辑等实验研究。这些病毒载体能够高效地将外源基因导入到靶细胞中,并且具有不同的特性和应用场景。

一、慢病毒(Lentivirus)细胞转染
慢病毒是一种逆转录病毒,属于RNA病毒,其转染过程具有较高的稳定性。慢病毒载体广泛应用于基因治疗、基因编辑和稳定转染等研究中。
1.优点:
(1)稳定转染:慢病毒能够将外源基因导入宿主细胞的基因组中,实现长期稳定表达,适用于长期细胞系的建立。
(2)感染范围广:慢病毒能够感染分裂与非分裂细胞,因此广泛应用于多种类型的细胞,如肿瘤细胞、干细胞等。
(3)低免疫反应:慢病毒与宿主细胞相互作用的过程中较少引发免疫反应,这使得它在一些临床前或临床基因治疗中具有优势。
2.转染过程:
(1)病毒包装:通过转染包装细胞系(如HEK293T)来生产慢病毒颗粒。包装细胞通常会转染表达慢病毒包膜蛋白、核心蛋白以及反转录酶等所需基因的质粒。
(2)病毒收获:经过一定时间后(通常48-72小时),包装细胞分泌出的慢病毒会被收集,并通过过滤去除细胞杂质。
(3)细胞感染:将病毒颗粒添加到目标细胞中,进行感染。感染的效率可通过添加聚多糖(如PolyBrene)来提高。
(4)筛选与扩增:通过筛选标记基因(如GFP或抗生素耐药基因)表达的细胞,获得稳定转染的细胞群体。
3.应用:
(1)基因敲除与过表达:用于研究基因功能。
(2)基因治疗:通过慢病毒载体递送治疗基因或RNA。
(3)模型构建:建立稳定转染细胞系,用于药物筛选或其他实验。

二、腺病毒(Adenovirus)细胞转染
腺病毒是一类双链DNA病毒,常用于基因表达、疫苗开发和基因治疗的研究。腺病毒的特点是能够高效地感染多种类型的细胞,并且不会将外源基因整合到宿主基因组中。
1.优点:
(1)高效转染:腺病毒能够高效地感染多种类型的细胞,包括分裂和非分裂细胞,因此转染效率非常高。
(2)短期表达:腺病毒在细胞内不会整合到基因组中,因此基因表达一般是暂时性的,这对于一些需要短期基因表达的研究非常合适。
(3)广泛适用:腺病毒载体能够感染哺乳动物细胞、肝细胞、上皮细胞等,因此在基因治疗、疫苗开发中有广泛应用。
2.转染过程:
(1)病毒包装:腺病毒载体的构建需要去除腺病毒的部分基因(通常是E1区域),然后通过将含有目标基因的质粒与腺病毒基因组重组,将目标基因插入到病毒中。
(2)病毒扩增与收获:通过转染腺病毒包装细胞(如HEK293细胞)来扩增病毒,并收获病毒颗粒。
(3)感染目标细胞:病毒颗粒被加入目标细胞进行感染。腺病毒的高感染效率使其成为急性基因表达实验的s选工具。
(4)基因表达:由于腺病毒不整合到宿主基因组中,因此其转染的基因通常会在细胞中暂时表达,表达的持续时间通常为几天到一周。
3.应用:
(1)急性基因表达:用于短期基因表达研究。
(2)疫苗开发:腺病毒载体常用于构建腺病毒疫苗。
(3)基因治疗:腺病毒可以作为基因治疗的工具,递送治疗基因。

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