酶ELISA试剂盒,即酶联免疫吸附试验试剂盒,是一种广泛应用于生物医学领域的实验室试剂盒。基本原理是利用抗原与抗体的特异性结合反应,以及酶对底物的催化作用来进行检测。具体来说,就是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(如聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原或抗体与固相表面的抗原或抗体发生特异性结合。在加入底物后,酶会催化底物发生反应,产生颜色变化,颜色的深浅与样本中相应抗原或抗体的量成正比。通过测定颜色反应的程度,可以半定量或定量地检测样本中的抗原或抗体。
酶ELISA试剂盒的操作步骤通常包括:
准备:将试剂盒和样本恢复至室温,并按照说明书进行稀释和加样。
加样:将标准品和样本依次加入固相载体中,每个样本通常设置复孔以提高准确性。
温育:在适当的温度和时间内进行温育,使抗原与抗体充分结合。
洗涤:用洗涤液彻d洗涤固相载体,去除未结合的物质。
加酶标记物:加入酶标记物,使其与已结合的抗原或抗体反应。
再次温育和洗涤:进行第二次温育和洗涤步骤。
显色:加入底物溶液,在酶的作用下使底物显色。
终止反应:加入终止液终止颜色反应。
测定:用酶标仪在特定波长下测定吸光度值(OD值),并根据标准曲线计算样本中抗原或抗体的浓度。
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