猪蓝耳病毒PCR核酸检测试剂盒

　猪蓝耳病毒PCR核酸检测试剂盒是即用型PCR试剂盒的改良产品，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。
1.方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
2.快捷，操作步骤已经限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3.本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
4.由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能扩增各种常见的DNA样品。
5.产物可直接用于T载体克隆，不需要额外的加A反应。
使用及效果：将本产品15μL与用户自备的模板，引物和水共15μL混合后，直接进行PCR反应(PCR参数由用户自己确定)，反应结束后直接取10μL电泳检查扩增结果。
猪蓝耳病毒PCR核酸检测试剂盒介绍：
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块(96孔)。
2、标准品(冻干品)：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200U/L，然后做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别配制成200U/L，100U/L，50U/L，25U/L，12.5U/L，6.25U/L，3.12U/L，样品稀释液直接作为空白孔0U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml(不要少于0.3ml)200U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、样品稀释液：1×20ml。
4、检测稀释液A：1×10ml。
5、检测稀释液B：1×10ml。
使用及效果：
PCR反应特点：
(1)特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2)灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中小检出率为3个细菌。
(3)简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4)对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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