植物ELISA检测试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物淀粉分支酶SBE水平。用纯化的植物淀粉分支酶SBE抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物淀粉分支酶SBE,再与HRP 标记的植物淀粉分支酶SBE抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成z终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物淀粉分支酶SBE呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物淀粉分支酶SBE浓度。
植物ELISA检测试剂盒的使用方法:
1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃;
2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加;
4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根Peroxidase(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min;
5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次;
6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min;
7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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