切片包埋

切片包埋
OCT冰冻切片包埋剂(O.C.T.Compound)
OCT冰冻切片包埋剂是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，目前已广泛用于免疫组化实验中，其用途是在冰冻切片时支撑组织，以增加组织的连续性，减少皱折及碎裂。又回OCT混合物为水溶性，故在漂片时可溶于水，所以在以后的染色中不会增加背景染色。利用OCT混合物（opti-mum cutting temperature compound）预先浸润组织，然后再进行恒冷箱切片，使切片质量得到改善。
OCT包埋剂（SAKURA产品，MADE IN USA）包埋流程：
1，将放在蔗糖溶液中的组织块取出，放入20g L-1蔗糖与OCT包埋剂1：1体积比例混合液中，室温浸泡2h
2，移入OCT包埋剂中室温浸泡4h，更换新的OCT包埋剂，室温浸泡6h.
3，将标本置于托物台，用恒冷箱切片机切片（一般－22℃），片厚10μm,贴于预处理的载玻片上，－20℃冰箱保存。
组织采样
1.从每个福尔马林固定石蜡包埋的标本上切下50µm的切片。每块标本至少要有两个切片，如果需要更多的细胞，则增加切片数量。每次从组织块取样之前和之后，按照5µm大小进一步分割，分出正常和恶性组织。
2.将分开的小切片放入10 mL管中。给管子贴上编号和「正常」「肿瘤」等标识
脱蜡
注意：在化学通风橱中执行以下脱蜡步骤。
1.通过向管中加入至少2至3 mL AmeriClear【AmeriClear histology clearing solvent(Scientific Products Cat.No.C4200-1)】，开始对切片进行脱蜡或脱蜡处理。在孵育步骤中，应有足够的试剂*覆盖石蜡切片。
2.剧烈涡旋震荡样品。与AmeriClear孵育的时间大约为10至15分钟，长为3小时。在移除试剂之前，请用移液管小心地将切片向上拉到试管的侧面，以保持组织完整。吸出剩余的试剂。
3.再加入2至3 mL AmeriClear，短暂涡旋，然后孵育10分钟。确保组织切片被试剂覆盖。流程如上所述。在进行复水步骤之前，请检查每个管子是否透明，这表明石蜡已*溶解。
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http://www.yjbio.net/yanjin-SonList-2193228/