探针法荧光定量PCR试剂盒

探针法荧光定量PCR试剂盒原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
?PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③TaqDNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
适用范围【参考值】
1.试剂盒有效性判定：
（1）阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
（2）阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。
2.标b结果判定：
（1）阳性：标b检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
（2）可疑：标b检测结果Ct值在35～38范围内。此时应对标b进行重复检测，如重复实验结果Ct值仍在35～38范围内，有明显指数增长期，则判定为阳性，否则为阴性。
（3）阴性：标b检测结果Ct值＞38或无Ct值。
PCR实验步骤:
典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
更多访问：
http://www.ysribio.com/SonList-2153104.html
https://www.chem17.com/st447429/erlist_2153104.html