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NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)

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最后更新: 2023-05-11 23:06
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公司基本资料信息
详细说明
测定意义:
MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH, NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
测定原理:
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一、提取液60 mL×1瓶,在4℃保存;
试剂二、液体50 mL×1瓶,在4℃保存;
试剂三、粉剂×2支,-20℃保存;临用前加入300μL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四、粉剂×2支,-20℃保存;临用前加入300μL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)
http://www.lifemallbio.com/Products-37509824.html
https://www.chem17.com/st534144/product_37509824.html
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