血红蛋白分析柱

  
血红蛋白分析柱  
1．凝胶的处理取3克葡聚糖凝胶（Sephadex-25）干粉，浸泡于蒸馏水中充分溶胀（室温，6小时），然后倾斜法除去表面悬浮的小颗粒，z后加入等体积pH7磷酸缓冲液继续浸泡（磷酸缓冲液用试剂1、2以39:51的比例混合，并用pH计校对）。  
2．装柱将层析柱下端的止水螺丝旋紧，向柱中加入约5-7cm高的缓冲液，把溶胀好的糊状凝胶边搅拌边到入柱中，同时开启止水螺丝，控制一定的流速，使柱中的凝胶一直处在溶液中。z好一次连续装完，若分次装入，需用玻璃棒轻轻搅动柱床上层凝胶，以免出现界面。装柱长度至少8cm。z后放入略小于层析柱内径的滤纸片，以防将来加样时凝胶被冲起。  
3．平衡用磷酸缓冲液洗脱，平衡20分钟。注意液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与z终生物大分子物质的分离效果。  
4．血红蛋白样品的制备取1ml抗凝血于烧杯中，加入10mlpH720mM磷酸缓冲液，再加入固体铁氰化钾，使浓度达到5mg/ml。  
5．层析柱还原层的形成取1ml40mMFeSO4于小烧杯中，加入1ml0.2MNa2HPO4,80mMNa2H2EDTA混合液搅拌均匀。待层析柱上缓冲液几乎全部进入凝胶时，速取该混合液0.4ml加入层析柱中，待混合液完全进入柱床后加入0.7ml缓冲液。（注意还原剂的混合液要新鲜配制，尽可能缩短在空气中暴露的时间）。  
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