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血红蛋白分析柱

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最后更新: 2022-09-21 16:00
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公司基本资料信息
详细说明
  
血红蛋白分析柱  
1.凝胶的处理取3克葡聚糖凝胶(Sephadex-25)干粉,浸泡于蒸馏水中充分溶胀(室温,6小时),然后倾斜法除去表面悬浮的小颗粒,z后加入等体积pH7磷酸缓冲液继续浸泡(磷酸缓冲液用试剂1、2以39:51的比例混合,并用pH计校对)。  
2.装柱将层析柱下端的止水螺丝旋紧,向柱中加入约5-7cm高的缓冲液,把溶胀好的糊状凝胶边搅拌边到入柱中,同时开启止水螺丝,控制一定的流速,使柱中的凝胶一直处在溶液中。z好一次连续装完,若分次装入,需用玻璃棒轻轻搅动柱床上层凝胶,以免出现界面。装柱长度至少8cm。z后放入略小于层析柱内径的滤纸片,以防将来加样时凝胶被冲起。  
3.平衡用磷酸缓冲液洗脱,平衡20分钟。注意液面不要低于凝胶表面,否则可能有气泡混入,影响液体在柱内的流动与z终生物大分子物质的分离效果。  
4.血红蛋白样品的制备取1ml抗凝血于烧杯中,加入10mlpH720mM磷酸缓冲液,再加入固体铁氰化钾,使浓度达到5mg/ml。  
5.层析柱还原层的形成取1ml40mMFeSO4于小烧杯中,加入1ml0.2MNa2HPO4,80mMNa2H2EDTA混合液搅拌均匀。待层析柱上缓冲液几乎全部进入凝胶时,速取该混合液0.4ml加入层析柱中,待混合液完全进入柱床后加入0.7ml缓冲液。(注意还原剂的混合液要新鲜配制,尽可能缩短在空气中暴露的时间)。  
https://www.chem17.com/st168624/product_37190662.html
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