什么是细胞培养?
细胞培养本身就是细胞的克隆,它通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中z核心、z基础的技术。但说到细胞培养我们就不得不提起HEPES这个有着两性离子的缓冲剂了。
HEPES
- 羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)CAS号为:7365-45-9,是一种白色结晶粉末,溶于水,是一种弱酸,其pH缓冲范围是6.8-8.2,是生物化工中重要的生化制剂,也是生物学研究领域中被认为是重要的缓冲剂之一。
为什么HEPES会是细胞培养的专家?
这是由于培养中细胞的生长和代谢会导致培养基的环境pH值发生剧烈变化,因此,为了维持可以稳定培养细胞的环境,是有必要向其中添加适量的某些生物缓冲液。但是,市场上有如此多的生物缓冲液和替代品可用于细胞培养,为什么要使用HEPES?通常,大多数细胞的z佳培养环境是pH 7.2-pH 7.4 ,HEPES的缓冲范围恰好在pH 6.8-pH 8.2内,这对细胞培养是有利的。与其他缓冲液(例如PBS(磷酸盐缓冲盐水)和TRIS)相比,HEPES在维持细胞培养基的pH值方面具有更高的稳定性,这也是HEPES广泛用于细胞培养,组织培养,蛋白质纯化和提取,免疫沉淀,细胞裂解,活细胞成像和其他生物/生化研究的原因。
注意事项:
HEPES在细胞培养基中的建议z终工作浓度通常为10mM至25mM。较高的浓度可能会导致在长时间的孵育过程中对细胞产生毒性。
如何处理和存储HEPES?
HEPES粉具有耐高温且熔点高达200℃的特性,因此不会因高压灭菌而降解,也可以使用0.2微米针筒式过滤器过滤HEPES缓冲液。如果将HEPES水溶液暴露在环境光下三小时,则会产生细胞毒性的过氧化氢(H 2 O 2),因此应注意,HEPES水溶液必须远离光线,以免影响实验结果。
不管再适合的东西,我们都要掌握它的特点和规律,所以多了解产品的特性,这样才能让其发挥出更大的功效。