缓冲液(Buffersolution)通常是由「弱酸及其共轭碱」或「弱碱及其共轭酸」缓冲对所组成的溶液,能够在加入一定量其他物质时减缓pH的改变。Buffer的作用是在有限的范围内调整溶液的pH值使待测溶液的酸度符合分析方法所规定的范围。在生化实验及其相关研究工作中,经常需要大量的缓冲液来维持实验体系的酸碱度。其中TRIS及其衍生缓冲液,在有机合成、涂料、防火材料以及生化和医药领域都有广泛应用,那么,在实际应用中有什么优缺点?
s先了解TRIS缓冲液
Tris,又称三羟甲基氨基甲烷,Tris缓冲液应用越来越广泛,尤其是核酸DNA相关的研究实验中,比PBS磷酸盐缓冲液更有优势。另一方面,Tris也是合成另一种生物缓冲剂TAPS的重要原料。Tris优点非常明显,其PH缓冲范围在7-9,碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的范围pH缓冲液;同时因为其不与重金属发生沉淀,可以一起作用,对生物化学过程干扰很小。因此Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,还有许多重要用途。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫(C.elegans)核纤层蛋白(lamin)的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的PH。
Tris缓冲液也有一些缺点需要注意:1、Tris缓冲液PH受浓度影响很大;2、受温度效应影响大,例如在室温25℃左右,pH是7.8的Tris一缓冲液,在4℃时是8.4,在37℃时是7.4,因此,4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时,其氢离
子浓度就增加了10倍。且它在pH7.5以下,缓冲能力很差。
几种常见的Tris衍生缓冲液
1、TBS缓冲液主要由Tris、氯化钠、BSA、防腐剂等组成,PH7.4,是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液,主要用于免疫组化和原位杂交,酶联免疫等实验中,清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。
2、TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液,主要由Tris-HCl、NaCl、tween20组成,pH7.2-7.5,主要用于免疫组化和原位杂交,酶联免疫等实验中,清洗免疫印。
3、TE缓冲液是由Tris和EDTA配制而成,一种电泳缓冲液,PH8.0,主要用于溶解核酸,能稳定储存DNA和RNA。
4、TAE缓冲液是由Tris、乙酸和EDTA组成的缓冲液,ph7.2-8.4,是大片段DNA短时间电泳时广泛使用的缓冲系统;
5、TBE缓冲液是由Tris碱,硼酸和EDTA(乙二胺四乙酸)组成的缓冲溶液。TBE缓冲液通常用于琼脂糖凝胶电泳,以分析由PCR扩增,DNA纯化方案或DNA克隆产生的DNA产物。湖北新德晟是专业从事生物缓冲液、采血管添加剂、化学发光试剂以及发光底物等产品研发、生产、销售一体高科技公司。十五年快速发展,德晟已拥有庞大的研发团队和实验基地,生物缓冲剂已形成包含TRIS、HEPES、TAPS、MOPS、CAPS、BICINE、EPPS、PIPES等一系列生物缓冲液。现在生物缓冲剂产品不仅在国内市场占有率高,已销往全球几十个国家,与众多大型生物医疗科技型企业建立长久稳定合作。