Tris缓冲液中添加还原剂的作用

三羟甲基氨基甲烷Tris缓冲液与核酸以及蛋白质有着良好的相容性，被广泛的应用于各种生物学实验。Tris的缓冲溶液体系非常多，比如Tris盐酸、Tris醋酸、TAE、TBE等，很多缓冲剂中还添加DTT、巯基乙醇或TCEP等还原剂，这是什么作用呢？

Tris缓冲液中添加还原剂，主要是为了保护蛋白质的稳定，通常是用于蛋白的分离纯化、蛋白质印迹、蛋白鉴定等实验。蛋白由多种氨基酸脱水缩合组成，有些可能含有半胱氨酸残基，它容易被氧化，并且可能导致蛋白质聚集沉淀。所以往Tris缓冲液中添加还原剂DTT，TCEP或者巯基乙醇，来防止上述问题。

Tris缓冲液中三种还原剂

1. 二硫苏糖醇，简称DTT，通常在蛋白纯化过程的缓冲液中添加DTT，它是常用的小分子有机还原剂，具有抗氧化的作用。化学式为C4H10O2S2，其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含的六元环状结构。添加浓度是5~10mM，还原剂浓度需要远远高于缓冲液中蛋白浓度。
2. 三（2-羧乙基）膦，简称TCEP，是一种非常有效的硫醇类，广泛用作化学及蛋白质组学研究中的定量还原剂。与其他类别的硫醇类还原剂如相比，TCEP不仅是一种高效的二硫键还原剂，而且在某些巯基的交联反应中不需要除掉。TCEP稳定性更好，但价格也更昂贵。
3. 巯基乙醇，即β-巯基乙醇（BME），可以保护质上自由的巯基不被氧化，从而避免蛋白质的聚集或变性。它只有一个巯基，还原能力较差，隔两三天就要补加一次保证效果。由于它是挥发性的，因此，可以在池液中加入beta-巯基乙醇，利用它的挥发扩散到液滴中去。

Tris缓冲液通常是在室温下配制的，而还原剂DTT和巯基乙醇在室温下就会降解，缓冲液中若添加了还原剂需要低温冷藏，或者使用时再往Tris里加还原剂。德晟在生物缓冲剂方向有着丰富的生产研发经验，可提供Tris、MOPS、HEPES等多种试剂。